PLA技术+蛋白翻译后修饰（PTMs）研究，蛋白研究新CP！

蛋白翻译后修饰 (PTM) 是指蛋白质合成后发生的化学修饰，这些修饰可以改变蛋白质的结构、功能和定位，在细胞信号传导、代谢和疾病发生发展中发挥重要作用。瑞典Navinci公司研发的临近链接技术（Proximity Ligation Assay, PLA）为研究PTMs提供了一种高灵敏度和高特异性的方法。

蛋白翻译后修饰 (PTMs)

蛋白质是细胞功能的主要执行者，而蛋白翻译后修饰通过在蛋白质上添加或移除特定化学基团，精细地调控蛋白质的活性、定位、稳定性及与其他分子的相互作用。常见的 PTM 包括：

• 磷酸化：磷酸基团的添加，通常由蛋白激酶催化，可以改变蛋白质的活性、定位和与其他蛋白质的相互作用。

• 糖基化：糖基的添加，可以影响蛋白质的稳定性、溶解度和与其他蛋白质的相互作用。

• 泛素化：泛素蛋白的添加，可以标记蛋白质进行降解。

• 乙酰化：乙酰基的添加，可以影响蛋白质的活性、稳定性和与其他蛋白质的相互作用。

PTMs在细胞信号传导、代谢、细胞周期调控、免疫反应和疾病发生发展中发挥着重要作用。例如，磷酸化可以调节酶的活性，糖基化可以影响蛋白质的稳定性和定位，泛素化可以标记蛋白质进行降解。PTMs 异常与疾病相关，以癌症为例，一些癌基因的过度磷酸化会导致细胞生长失控，而一些抑癌基因的过度泛素化会导致其降解，从而促进肿瘤生长。

Schematic PTM discovery timeline for 10 major PTMs

临近连接技术 (PLA)

PLA技术由瑞典NAvinci技术公司开发，其核心原理基于临近效应引发的信号放大（Söderberg, O. et al. (2006). Direct observation of individual endogenous protein complexes in situ by proximity ligation. Nature Methods, 3(12), 995 - 1000.）。

PLA 实验流程：该技术使用两对抗体，每对抗体分别连接一段独特的寡核苷酸序列。当这两对抗体特异性地结合到目标蛋白复合物上彼此靠近（通常距离在40nm内）时，连接在抗体上的寡核苷酸序列也随之靠近。此时，通过DNA连接酶将相邻的寡核苷酸连接起来，形成一个完整的可扩增的DNA环。随后，利用滚环扩增技术（rolling circle amplification, RCA）对这个DNA环进行大量扩增，产生一条长链的单链DNA，其上包含多个重复的序列单元。最后，通过荧光标记的互补寡核苷酸探针与扩增后的DNA链杂交，借助荧光显微镜或其他荧光检测设备即可检测到荧光信号，荧光信号的强度与目标蛋白复合物的数量成正比，从而实现对目标蛋白复合物的定性和定量检测

PLA 技术检测PTMs 应用案例

• 磷酸化HER2 检测

采用Naveni pY HER2试剂盒检测，Detection fluorophore TEX615

• 磷酸化EGFR 检测

采用Naveni pY EGFR试剂盒检测，Detection fluorophore TEX615