ARMS技术的解析（二）

ARMS技术的解析（二）

ARMS技术在肿瘤的个体化分子检测、基因突变和SNP位点检测中已被广泛运用，并且其在临床应用中的优势已被业内大家广泛认可。但是如何熟练掌握运用ARMS技术，则需要一定的基础理论知识和实验摸索能力。ARMS技术的核心在于如何筛选ARMS引物。引物才是它的核心。

ARMS技术中：TaqDNA聚合酶缺少3′→5´外切酶活性,因此对于3′末端错配的引物,以低于正常末端配对引物的速度延伸,当错配碱基的数目达到一定程度或者条件达到一定的严谨程度时, 3′末端碱基则因磷酸二酯键形成困难而不能延伸,反应终止。这句话前半部分解读是如果3′末端只有一个碱基的错配，那么是引物是可以错配结合的并可以进行延伸的，只是延伸的效率低于那些3′末端正好配对的引物；后半部分解读是如果在3′末端引入了其他的错配碱基，那么错配的数目太多或达到一定程度（不引入其他错配见估计，单单因为错配的类型和分子大小的问题），那么3′末端无法进行延伸的。

在此引入TaqMan-MGB技术，TaqMan-MGB技术的核心在于如何筛选MGB探针（某些Block可以参考这个MGB设计方法）：

• 为什么MGB能够增强探针的Tm值？

MGB全称是Minor Groove Binder，是位于探针3‘端的，意思就是小沟结合物，这个使得探针可以与DNA链的小沟结合，使MGB探针的Tm值要高于普通的TaqMan探针。

• 为什么MGB能够增强探针的特异性？

现在探针一般用于SNP分析吧，普通TaqMan探针因为要达到预定的Tm值（一般为68℃左右），因此设计的都比较长，可能要20个bp左右，一个碱基的差别可能不能很好的区分野生和突变的模板，但MGB探针可以让探针的长度缩短至13-16个bp，无疑可以提高与其匹配的模板的特异性。（Block可以根据这个高特异性来选择设计）

下面是整理的ARMS技术PPT，需要的可以联系我：