你的RNAi文章为什么被驳回了？
What？RNAi的坑到底在哪？
历时2年做出的实验结果，终于在文章投出的时候轻松片刻！但是，一个不留神就可能被要求补数据！
按照Nature的标准，一个严格的RNAi介导knockdown实验要有6个对照：
1
转染试剂对照（监控转染及培养条件对结果的影响）；
2
nonsense siRNA对照（监控外源核酸本身对结果的影响）；
3
positive siRNA对照（监控假阴性）；
4
重复对照（也叫off-target 对照，也就是利用至少2个靶点的siRNA同时实验，由于靶点序列不同，脱靶至同个基因的概率几乎为0，所以2个siRNA互为off-target control，当两者的表型相同时，才有可能是特异性的knockdown效应）；
重复对照的另一个途径是RNAi搭配基因编辑技术使用，分别在RNA、DNA水平的敲减操作既实现off-target control，又因为使用了不同的技术路线，提高了文章亮点[1]。
5
rescue对照（也称回复突变或者拯救实验：将siRNA与靶基因结合处进行同义突变，并将该序列在已knockdown的细胞内过表达，看是否有性状的逆转，若逆转，表示性状的改变同靶基因相关；若无逆转，则性状的改变是因为脱靶造成的）；
6
全表达组扫描对照（就是转录/表达芯片扫描，以最终确定表型不是由于off-target造成）。
siRNA剂量引发脱靶效应
siRNA种子区引发脱靶效应
浅蓝色表示下调的转录物
红色表示上调的转录物
灰色表示无显著变化的转录物
深蓝色表示符合种子区结合的下调转录物
序列表示靶点并标记出种子区
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关键词:
RNAi,脱靶,基因,碱基,效应,靶点
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