透析用水·透析液液细菌培养，必须掌握的几点

“女神节，

愿身边和远处的女性朋友

身体健康，万事顺意，开心快乐！”

“水”，在血液透析治疗中占据“龙头”效应，一次透析大约使用120升水，绝大部分水来源于透析用水，进而与浓缩透析液按一定比例进行混合后，各项指标合格（如，细菌、内毒素，电导度和温度、pH值等），其中“细菌培养”所用培养基，不能使用血培养基，而应该使用寡营养基（如TGEA、R2A），合适的培养基培养的结果才是可信的，才是可以持续改进的依据之一。 今天和大家一起学习TGEA方面的知识点！

透析中心没有合格的“水”，停业整顿离着就不远了，保证“水”的合格的同时，还应该高质量的进行检测并评价，不存侥幸，实事求是地完成我们每一项关乎生命的工作。

首先，为什么关注“水液”的细菌问题？         

在水和透析液中，常见的细菌是革兰阴性菌和非结核性分枝杆菌，他们特别适合在水中生存。革兰阴性菌在透析用水和透析液有合适的温度、营养和pH时，他们能很快繁殖，如果透析膜出现破坏，细菌就可以进入患者的血液中，引起毒血症。即使透析膜不破，细菌的产物和细胞膜的成分也可以通过透析器膜孔进入血液，引起患者的致热源反应，使患者出现发热、寒战、低血压、恶心等症状，严重的导致患者死亡。         

至于如何杀死细菌？如加热、化学杀菌，也可以被一些系统过滤掉。（这部分设计水处理及供水管道的消毒，这里暂不讨论，欢迎留言！）         

关于细菌培养：         

根据行业标准YY0572-2015及2021版SOP要求：     透析用水及透析液的细菌培养标准：如下图：“透析用水和透析液，细菌总数不超过100CFU/ml，超过50%，应进行干预”    

【重点】“细菌总数”如何准确获得？

可选择胰化蛋白胨葡萄糖（tryptone glucose extract agar，TGEA）培养基、R2A 营养琼脂培养基或其他确认能提供相同结果的培养基，不能使用血琼脂培养基和巧克力琼脂培养基。

【培养条件】17～23℃的培养温度和7d 的培养时间。

【合适的培养基】常用TGEA/R2A 简介       

TGEA配制和使用方式  [3]：（一般机构，其配制和培养由检验科完成；需要透析中心做的：确认培养基和排样方法与标准的一致性）            

 1、适用于水中或奶类产品的细菌数量检测及探测噬热微生物。        

2、配方：      

• 牛肉抽出物(Beef extract) 3.0克

• 胰化蛋白胨(Tryptose) 5.0克

• 葡萄糖(Glucose) 1.0克

• 琼脂(Agar) 15.0克

• pH值 7.0±0.2

3、使用方法：       

将上述24g的成份溶于1升的蒸馏水里，煮开至成份完全溶解。采用高压灭菌方法在121°C温度下消毒15min，冷却至50℃左右后倒进培养皿里，室温下凝固。        

4、备注参考：       

此份量的培养基可制备50只培养皿（以每只培养皿20ml计算）。如用户认为此份量过多，可按比例将份量減少。例如:24g可溶于1L蒸馏水，可制备50 只培养皿；12g可溶于500ml蒸馏水，可制备25只培养皿；6g可溶于250ml蒸馏水，可制备12.5只培养皿，以此类推。       

5、储存条件       (只适用于商品性TGEA培养基)干燥的培养基应储存于25摄氏度以下，并在有效期前使用。       

制成后的培养基应以塑料袋密封并于2～8摄氏度储存，保存期为14天。       

“开始下面学习之前，先邀请您做个小调查”（单选）       

【正确的采样方法】       [3]       

反渗水采样方法       

①使用反渗水循环管道末端的采样口或者把透析机连接到循环管道处的软管拆下(如果在此处安装有采样口，可直接取样)。       

②打开反渗水球阀，用反渗水冲洗球阀内部30s。       

③用70%的酒精消毒反渗水管球阀下的接头外侧，最好连续消毒两次。       

④等酒精已完全挥发，用已灭菌的瓶子或试管收集反       渗水，注意瓶子或试管入口不 能碰到接头(采样口)外侧。             

透析液细菌采样方法:       

①将透析浓缩液连接到血液透析机上，让机器进入自检状态。       

②待血液透析机的自检程序结束以后，安装一次性透析器和透析管路。       

③将透析液快速接头按照要求连接到透析器上。       

④让透析液由下向上进入透析器。       

⑤关闭透析液，取下透析器透析液出口的快速接头。       

⑥将透析器倾斜45度，打开透析液开关，让透析液自然流出。       

⑦用已灭菌的瓶子或试管收集透析液，注意瓶子或试管入口不能碰到接头(透析器透析液出口)外侧。       

注意：透析液采样：目前多数采取下面的方法进行采集：      

• ‍透析机自检合格后，上机治疗前采集

• 取下透析液供液侧快速接头（费森机器红头，日机装或金宝蓝头等）‍

• 医用酒精消毒接头内外壁

• 酒精待干后，打开流量，透析液流出60s后，取样

• 每当透析液涌出时，用注射器取样

• 注射器针尖或无菌吸液管不能接触快速接头，取样时针尖要在密封圈以下尽量不抽或少抽空气需要多点采样，更便于问题分析与评价 采样时，必须遵循无菌技术 这个采样口不能采样细菌培养：透析机自带的取样口      

【严格采样工具与容器】

• 必须无菌的采样工具，无菌无热源更好

【及时送检】样本在4小时内进行检测，或立即冷藏，并在24小时内进行检测。若是第三方送检，必须与第三方沟通采样时间，避免长时间冷藏堆积在医院影响检测结果。                   

【培养方法】采用常规的细菌总数检测方法（倾注平板法、涂布平板法、薄膜过滤法），薄膜过滤法是首选检测方法，不接受接种环法。

【建立良好的沟通】，如，危急值报告制度 认真履行“细菌总数超过50%”即刻告知透析中心，以便尽快并及时采取措施。             

记住：无论是自己单位的检验科还是第三方送检，均应建立此制度。       

【深化细菌总数动态评价理念】 将每月不同采样点的不同细菌总数进行纵向比较，以便根据其变化趋势调整水处理消毒频率。       

编后语：血液透析方方面面，需要正确的采样、标准的检测获得真实的结果，还要及时评价，做好必要时的补救措施，以免耽误肾友治疗！      

参考：            

[1]血液净化标准操作规程2021版

[2]YY0572-2015

[3]血液净化临床工程技师日常工作内容和常规操作的指导意见

[4]《血液净化学》第4版