一文教你分清楚实验室常见的几种染色方法

作者：中南大学湘雅医学院--王雪梅

当你在微生物室的时候，你要学会给微小的细菌们涂上颜色：

01

革兰染色

染色现象：

染色原理：

⏩ 渗透学说：革兰阳性细菌细胞壁结构致密,肽聚糖层厚,脂质含量少，乙醇不易渗入。革兰阴性细胞壁疏松,肽聚糖薄,且脂类含量高，乙醇易渗入。  

⏩ 等电点学说：革兰阳性菌的等电点较低（pH2-3），阴性菌较高（pH4-5）。在相同pH条件下，G+菌所带负电荷多，与带正电荷的结晶紫染料结合牢固，不易脱色。

⏩ 化学学说：G+菌体内有核糖核酸镁盐与多糖复合物,碘液在菌体内与结晶紫结合后又和菌体内核糖核酸镁盐-蛋白质复合物结合，此结合物不易被酒精脱掉。

染色步骤：

（结晶紫）初染  ➡（碘液）媒染  ➡（95%乙醇）脱色  ➡（复红）复染

02

抗酸染色

主要用于分枝杆菌属检测，比如从肺结核患者的痰标本中检测结核分枝杆菌。

染色原理：

分枝杆菌的细胞壁内含有大量脂质（主要成分为分枝菌酸），具有抗酸性，染色时与石炭酸复红结合牢固，能抵抗盐酸乙醇的脱色作用，因此抗酸菌能保持复红的颜色，达到染色目的。

染色现象：

➡抗酸杆菌呈红色(+)

➡其他细菌和背景物质为蓝色(-)

染色步骤：

（石炭酸复红）初染  ➡（3%盐酸酒精）脱色  ➡（碱性美兰 ）复染

其他特殊染色：

当你在临检室或者血液科的时候，你要给血细胞们涂上色：

03

瑞氏染色：

主要用于对血细胞进行染色。

染色原理：

瑞氏染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成的复合染料，由于细胞内不同物质成分对各种染料的亲和力不一样，如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性物质，易与酸性染料伊红结合而被染成红色；细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性颗粒为酸性物质，与碱性染料结合后被染成蓝色或深蓝紫色；中性颗粒呈等电状态，与伊红和亚甲蓝均可结合，被染成淡紫红色；原始红、早幼红细胞胞质及核仁含较多酸性物质，被碱性染料染成较浓厚的蓝色。本染色液经常用于血细胞涂片、骨髓细胞涂片、脱落细胞涂片、细菌染色，细胞质呈红色，细胞核及细菌呈蓝色，嗜酸性颗粒呈橘红色。

染色步骤：

依次滴加瑞氏染液（含甲醇）——磷酸盐缓冲液——流水冲洗

04

POX染色

染色原理：

血细胞中的髓过氧化物酶（MPO),主要存在中性粒细胞、单核细胞。中性杆状及分叶核粒细胞呈强阳性是染色成功的标志。在细胞的胞质中出现蓝色或蓝黑色颗粒为阳性反应。急性白血病时,白血病细胞POX反应强弱顺序M3> M2b> M2a> M6(粒)> M4 >M1> M5>ALL。

染色现象：

（图例为急性早幼粒细胞的POX染色）

05

NAP染色（中性粒细胞碱性磷酸酶染色）

中性粒细胞碱性磷酸酶存在于成熟中性粒细胞内,主要见于中性分叶核及杆状核粒细胞。

染色原理：

偶氮偶联法

NAP阳性结果及积分判断标准：

1) 阳性反应：胞质中出现灰色或棕黑色沉淀。

2) 阳性反应分级标准。

（-）0分   胞质中无阳性染色颗粒

（+）1分  胞质中含少量颗粒或呈弥漫浅色

（++）2分  胞质中含中等量颗粒或呈弥漫着色

（+++）3分  胞质中含较多颗粒或呈弥漫较深色    （++++）4分 胞质中充满粗大颗粒或弥漫深色

成熟中性粒细胞（分叶、杆状)呈阳性反应，其他细胞基本呈阴性。

参考区间：NAP阳性率< 40%   积分：30-130分 。

06

铁染色：

染色原理：

正常骨髓中有一定量的铁，以铁蛋白和含铁血黄素形式储存，用以合成血红蛋白，这种储存的铁称细胞外铁。幼红细胞及红细胞中含有的铁,存在于胞质中，被称为细胞内铁，这类红细胞称铁粒幼红细胞。

染色现象：

细胞外铁观察阳性为蓝绿色沉淀

环形铁粒幼红细胞的标准：铁粒幼红细胞含有粗大深染的铁颗粒含5粒以上，围绕核周1/3以上者。

临床意义：

1）此方法可作为诊断IDA及指导铁剂治疗的重要依据；经铁剂治疗后细胞内外铁迅速增多。

2）鉴别贫血类型

⏩ 缺铁性贫血:  外铁↓或(－)，内铁 ＜15% 。 

⏩ 铁粒幼细胞性贫血：细胞内、外铁增多，环形铁粒幼红细胞增多。

⏩ MDS-RAS：内铁阳性率↑，环铁＞15%。

参考资料：

人卫版《临床基础检验学技术》

人卫版《临床血液学检验学技术》

人卫版《临床微生物学检验学技术》

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编辑：青翠欲滴

审校：晨晨