【衡道丨笔记】病理基地医生荧光原位杂交（FISH）应用带教

内容摘要

FISH技术的原理及操作过程

原理: 通过荧光素标记的核酸探针与组织细胞核内的核酸 (DNA或RNA)按碱基配对原则进行特异性结合，在荧光显微镜下显示细胞基因状态的方法。

目的:获得细胞内染色体或基因信息，获取基因的扩增，易位，融合等异常状态。

探针类型：计数探针、分离探针、融合探针、WPP探针

FISH技术介绍:

流程：制片、脱蜡、预处理、酶消化、变性杂交、洗片、DAPI染色、阅片

FISH技术的临床应用及判读标准

各癌种的检测简介：

乳腺癌HER2检测指南

胃癌HER2检测指南

食管癌检测指南

结直肠癌HER2判读标准

尿路上皮癌HER2检测

非小细胞肺癌ALK检测

非小细胞肺癌RET检测

胶质母细胞瘤

少突胶质细胞瘤

FISH技术应用举例及遇到的问题

病例一：

20S68540(超声造影引导下右肺肿块穿刺活检)低分化癌伴坏死，结合形态及免疫组化结果，为腺鳞癌。

ARMS基因检测: ROS1基因存在融合。

FISH检测结果: 鳞癌区域约30%肿瘤细胞存在ROS1基因红绿分离信号及单独绿色信号，以单独绿色信号为主，FISH结果为阳性。

病例二：

女性，55岁

病史:发现左侧颈部包块1个月。

颈部超声示:左侧颈部间数个低回声结节，最大者35*13*22mm,边界清，内部回声欠均匀。

2017年11月28日行穿刺活检（颈部淋巴结）送检穿刺组织内散在较多浆细胞浸润，伴灶性淋巴细胞浸润，目前肿瘤性病变证据不足，若临床怀疑肿瘤，建议重新活检。

2017年12月20日行第二次活检穿刺。

(左颈部淋巴结穿刺)送检穿刺组织内纤维组织明显增生，伴较多浆细胞浸润，局灶淋巴滤泡形成，免疫组化提示小血管周围较多淋巴细胞、浆细胞浸润，肿瘤性病变证据不充分。

2018年9月14日行第三次活检穿刺。

（超声引导下左侧颈部淋巴结穿刺）镜下在多量炎症细胞背景上，间增生的梭形细胞成分炎症细胞有淋巴细胞及浆细胞MDM2基因检测，发现梭形细胞有MDM2扩增，考虑为炎症性脂肪肉瘤。

经常会误诊的病例：

Castleman 病

淋巴瘤/淋巴组织不典型增生

炎性肌纤维母细胞瘤

病例三：

男，34岁

2018-01-01咳嗽

2018-02-18罗阳镇卫生院，胸片示肺部阴影

2018-02-19青口二院就诊

2018-03-02连云港市第一人民医院就诊

2018-03-20苏州市立医院，CT示左肺占位，肺癌可能，肺穿刺活检示恶性肿瘤。

镜下形态：

免疫组化：

阳性: Vimentin、CD30、ALK、Desmin、KI67 30%

阴性: LCA、CD20、CD3

FISH结果：

ALK基因分离探针检测结果示约50%肿瘤细胞可见ALK基因信号分离及单独红色信号，提示FISH检测结果为阳性。

病理诊断:(肺穿刺组织)分化差的多形性肉瘤样肿瘤，基因检测结果示ALK阳性，可归类为ALK瘤 (间变性ALK瘤)，建议临床医师与病理科密切联系。

ALK阳性的肿瘤：

炎性肌纤维母细胞瘤

ALK阳性的弥漫性大B细胞淋巴瘤

ALK 阳性的间变性大细胞淋巴瘤

少数胚胎性横纹肌肉瘤

神经母细胞瘤

恶性外周神经鞘膜瘤及组织细胞肿瘤等

病例四：

20S67200(坐骨病变)骨小梁间可见分化差恶性肿瘤，伴大片坏死，结合免疫组化结果，考虑高级别淋巴瘤，考虑间变性淋巴瘤。

第一次FISH，因脱钙后组织，无有效信号。

第二次FISH，组织深切后，可见信号，有助于间变大细胞淋巴瘤的诊断。

经验:对于脱钙标本，因深部组织可能对盐酸脱钙液浸透不充分对DNA影响较小，蜡块经深切后，信号也会出现，但要综合评估.

设计：鹏飞

编辑：小约翰

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