双歧杆菌V9在便秘和腹泻患者中的临床研究

双歧杆菌V9（anz'malisV9）是一种从健康人体肠道分离的益生菌菌株。经鉴定为动物双歧杆菌亚种。与Bifidobac—teriumanimalissubsp．LacticBB12的同源性为99％。 B.animalisV9具有良好的耐酸性、人工胃肠液耐受性和胆盐耐受性，不携带耐药质粒。研究结果表明，B.animalisV9可通过拮抗腹泻的致病菌，有效治疗腹泻小鼠。为了进一步验证B.animalisV9的疗效，此次实验以153例便秘和急慢性腹泻患者为试验对象，对B.animalisV9进行了为期3周的临床试验。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1研究对象：

随机抽取住院的便秘、腹泻患者153例（10岁以下73例，10—30岁35例，30—55岁45例）进行了一项治疗研究，包括43例便秘患者和110例腹泻患者（慢性和急性腹泻）。治疗期间，患者未服用任何抗生素，饮食与治疗前相同。

1.1.2B.animalisV9用于检测的菌粉：

B.animalisV9菌粉由内蒙古自治区轻工科学研究院提供，其成分包括B.animalisV9活菌体、脱脂奶粉、乳糖（36.9%）、其中B.animalisV9的活菌数为1．0×10“cfu／g。

本菌粉已完成安全性试验。

1.1.3器械和试剂：

组织粉碎机、厌氧罐、OLYMPUSBX50光学显微镜和OLYMPUSPM-20型摄像系统。

1.2方法

1.2.1B.animalisV9菌粉的给药方法：

将菌粉溶于温水或牛奶中，每次0.1g，每日1次（1.0×10cfu/d），饭后服用，连续服用21天。

1.2.2便秘和腹泻的评价标准：

便秘和腹泻患者的入选标准参照罗马III肠易激综合征（IBS）标准。急性腹泻持续时间少于2周，慢性腹泻持续时间超过2周。

1.2.3排便次数和排便状态记录：

由经过统一培训的记录员每3天咨询并记录患者的排便次数和大便形状，然后统计按照下式每周排便次数和大便形态的描述对应于表1。

每周排便次数（次/周）=3/7×排便次数（3天内）。

1.2.4肠道菌群的检测：

试验前后各取患者粪便2—5g，置于密闭厌氧池中，在冷藏条件下立即送验室检测肠杆菌属、肠球菌属、拟杆菌属，以及乳酸杆菌、双歧杆菌、产气荚膜梭菌活菌。取粪便1g，加入PBS缓冲液9mJ，再加入无菌玻璃珠充分摇匀，作为1:10的供待检液，然后连续10倍稀释。取适当浓度的含菌溶液，铺于适合肠杆菌属、肠球菌属、拟杆菌属、乳酸杆菌属、双歧杆菌属和产气荚膜梭菌生长的选择性培养基上，每次稀释3次。在有氧或厌氧条件下培养48小时，选择菌落数为30—300的培养基进行计数，计数前进行细菌镜检和鉴定。肠道菌群选择培养基及其培养条件。

1.2.5便秘、腹泻患者治疗率的计算

1.2.6数据分析采用SAS软件进行方差分析。

2结果

2.1便秘患者的排便次数及大便状态

测试过程中，分别在0、3、6、9、12、15、18、21d询问并记录43例便秘患者（其中8例10岁以下。21个10岁到30岁的人。30-55、岁14名）排便次数和粪便形状。

图1显示，在服用B.animalisV9期间，受试者的平均排便频率发生了显着变化（P<0.01）。其中，8名0-10岁便秘受试者服用D3后，排便次数明显增加。连续服用9天后，平均排便次数已达到每周4～9次的正常指标，大便情况与表1健康人基本相同。服用6天后，21名10—30岁受试者和14名30—55岁受试者的平均排便次数明显增加，分别在第12天和第15天达到正常人群的排便标准和粪便状况。

43例不同程度、不同年龄的便秘患者连续服用B.animalisV92l天后，均未发现任何不适症状。

2.2腹泻患者排便次数及大便情况

测试期间，在第0、3、6、9、12、15、18、21天询问并记录腹泻患者110例（其中10岁以下65例，14位10岁到30岁的人。30岁至55岁的31人），排便频率和大便模式。

从图2可以看出，在服用B.animalisV9期间，受试者的排便频率都有显著性变化（P<0.01的情况下进行的）。其中，65例0—10岁腹泻患者（急性占81.5%，慢性占18.5%）服用3天后排便次数明显减少。连续服用12天后，平均排便次数达到每周4～9次的正常指标。并且粪便的状态基本上是表1中所描述的健康人群的粪便状态。14例10～30岁腹泻患者（急性占21.4%，慢性占78.6%）服用3天后，平均排便次数在第18日达到正常人群排便及粪便状况标准。31例30～55岁腹泻患者的平均排便频率（急性占16.1%，慢性占83.9%）服用6天后排便次数明显减少，21日平均排便次数达10.63次/周。并且已经接近正常人的排便标准。

110例不同程度、不同年龄的急慢性腹泻患者连续服用21天/7在B.animalisV9期间，没有发现任何症状。

2.3便秘腹泻患者在服用前后肠道菌群变化

便秘腹泻患者在服用B.animalisV9前和连续服用21天后，对粪便中双歧杆菌、肠杆菌、肠球菌、拟杆菌、产气荚膜杆菌进行活菌计数，同时以健康人群(包括5～8岁儿童3名、l5～25岁青年3名、40～50岁中年3名)肠道菌群活菌数的平均值作为对照进行数据分析。

由表3可看出，便秘和急慢性腹泻患者肠道菌群数量与健康人群比有较大差异，最显著的是双歧杆菌数量明显低于健康人群。连续21天服用B.animalisV9后(1．0×10cfu／d)，便秘和急慢性腹泻患者肠道菌群结构有明显变化(尸<0．01)。其中43例便秘患者肠道中双歧杆菌注苗数由服用前的6．1lgcfu／g增加至8．951gcfu／g，肠杆菌数量显著(尸<0．01)升高，肠球菌、拟杆菌数量有不同程度的下降，产气荚膜杆菌数量未发生明显的变化。61例急性腹泻患者肠道中的双歧杆菌活菌数由服用前4．37lgcfu／g增加至9．35lgcfu／g，肠球菌、拟杆菌、产气荚膜杆菌数量均有不同程度的增加。49例慢性腹泻患者肠道中的双歧杆菌活菌数由服用前的6．3lgcfu／g7增加至9．56lgcfu／g，肠杆菌和肠球菌数量有不同程度的下降，拟杆菌数量增加，产气荚膜杆菌数量未发生明显变化。

2.4便秘腹泻患者治疗结果

连续21天服用B.animalisV9后，便秘和急慢性腹泻患者病情的有效率达到89．9％以上，其中对急性腹泻患者的治愈率达到83．6％，对便秘和慢性腹泻患者的治愈率分别为75．3％和71．9％。

3讨论

肠易激综合征的病理生理基础主要是胃肠动力障碍和内脏感觉异常，但其变化机制尚不十分清楚。有证据表明IBS患者肠道微生态环境发生了变化。主要表现为对人体有益的双歧杆菌减少，而具有潜在致病作用的肠杆菌科细菌过度生长，导致双歧杆菌/肠杆菌科细菌之比（B/E）<1，这意味着微生物移植耐药性<l，易使潜在致病菌及外来致病菌过度生长产生便秘、腹泻等肠道功能失调症状。益生菌可通过以下机制缓解肠易激综合征患者。

症状：（1）产生双氧水、有机酸和抗生素等化学物质，抵抗致病菌的定植和生长。（2）通过营养物质的竞争，维持肠道菌群数量和种类的平衡。（3）通过与肠粘膜上皮紧密结合形成生物膜，取消致病菌的吸附位置。（4）提高肠粘膜的免疫水平。

目前便秘的治疗一般采用乳果糖(乳果糖)或聚乙二醇(PEG)等口服泻药，但只有约60%的患者能治愈，因此需要采取更有效的治疗方法。

以双歧杆菌和乳酸杆菌为代表的益生菌能产生乳酸、醋酸等有机酸来降低结肠的pH值，而较低的pH值又能促进结肠蠕动，从而减少结肠通过的时间，这对于治疗便秘是有益有意义的。益生菌在缓解成人便秘中的功效的大量研究“证明当成年人补充B.animalis时，食物在结肠的过境时间减少。益生菌L.Shirot和infantis可以增加成人便秘和IBS患者的排便次数和软化粪便。对儿童便秘的研究表明，L．rhamnose也能增加排便频率，减轻腹痛。

本研究表明，B.animalisV9能显著缓解和治疗便秘患者的症状，且无任何副作用，治愈率高达75.3%。益生菌治疗胃肠道疾病的临床疗效是复杂的：不同终点的评估，以及益生菌菌株和剂量的变化。但本实验对以后的疗效评价有一定的意义。所得结果充分证明了该菌株对便秘患者的治疗效果。

目前腹泻的治疗方法仅限于维持和对症治疗。症状严重者采用口服补液治疗。抗生素治疗在85%至95%的病例中不是很有效，因为病因不明或由病毒引起。腹泻的常见原因包括轮状病毒、沙门氏菌、志贺氏菌、艰难梭菌、内阿米巴、腺病毒、此外，仍有31%～48%的病因无法解释。

益生菌可以为急性腹泻提供有效治疗，特别是那些由胃肠道正常菌群紊乱引起的腹泻。正常菌群具有定植抵抗力，即抵抗病原菌入侵和定植肠道的能力。一旦正常菌群被破坏，机体就容易发生感染，而肠道正常菌群的恢复需要在停用抗生素后8周。益生菌可以替代正常菌群，对这种易感性有独特的治疗效果。这时，益生菌可以通过产生抑菌素、修饰毒素、干扰致病菌附着、促进免疫系统等途径达到治疗目的。在本研究中，益生菌B.animalisV9对急性腹泻和慢性腹泻患者的治愈率分别高达83.6%和71.9%，且无任何毒副作用，充分证明了该菌株对腹泻患者的治疗效果。

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