临床检验项目的可报告范围，如何验证？

写在前面：

继续说说性能验证，前文说完了精密度、正确度和线性的验证，今天说说可报告范围的验证，这个对于临床报告有着十分重要的作用，话不多说，直接开始。

PART01 :关于可报告范围的相关概念

空白：不含分析物或含量至少低于有意义的最低水平的样本。  

空白限（LoB）：测定空白标本时可能观察到的最高测量结果。需要注意的是：并非样本中实际被测物的浓度，空白线也称作静状态变量临界值。

检出限（LoD）：由给定测量程序获得的测得值，其声称的物质成分不存在的误判概率为β，声称的物质成分存在的误判概率为α（IUPAC推荐α和β默认值为0.05）。也被称为检测低限、最小检测浓度。

定量限（LoQ）：满足声明的精密度和正确度，在声明的实验条件下能够可靠定量的分析物的最低浓度，又称定量检出限。

被测量：拟测量的量，在医学试验中，被测量的规范要求包含种类（例如质量、浓度）、携带特征（例如全血、血浆）以及对应的化学实体（例如分析物），被测量可具有生物活性。

测量范围：在规定的条件下，由具有一定的仪器不确定度的测量仪器或测量系统能够测量出的一组同类量的量值。在通用计量属于中被定位“测量区间”，测量范围的下限与检测限不应相混淆。

PART02：可报告范围CCR与分析测定范围（AMR）有什么区别？

分析测量范围AMR是指样本不需做稀释、浓缩等任何预处理直接使用检验程序或检测系统进行检验所获得可靠结果的范围，有时又称测量区间，对于两点校准通常又称为线性范围（注意这里说的是没有浓缩或者稀释）。  

可报告范围CRR是指对临床诊断、治疗有意义的待测物浓度范围，此范围如果超出了AMR，可将标本通过稀释、浓缩等预处理使待测物浓度处于AMR内进行测量（注意的是临床可以报告的范围，其中包括稀释与浓缩的过程）

可报告区间的下限的确定与测量系统的检出能力有关，即为LoQ（不可能为0），可报告区间的上限的确定与线性区间有关，为CRR上限（AMR上限×最大稀释倍数），这里就会出现一个最大稀释倍数问题（为什么不可以无限稀释，直到出现“可报告”的结果），当稀释倍数超过一定时，就会出现检测结果超过允许最大误差范围的情况，这个也就是要做可报告范围的一个原因（寻找最大稀释倍数）。

PART03：空白限（LoB）、检出限（LoD）和定量限（LoQ）的区别与联系

LoB和LoD是基于检测方法的变异和Ⅰ类及Ⅱ类错误设置的统计学术语，而LoQ的确立与定量分析项目的临床应用需求及方法建立者选择的可接受目标有关。  

大多数情况下，LoB应小于LoD，而LoQ可等于或高于LoQ，但不小于LoD，小于LoD的报告为“未检出”。

某些特定条件下三个参数没有实际意义。例如凝血项目中的PT和APTT。

对于同一项目不同类型标本由不同检出能力的方法，应对每种样本类型确立各自的检出能力。  

通俗的理解是LoB，是用空白样本（不含有待测物质，例如水、稀释液等等）去测试，在一定的概率下能测得的最高测量结果，请注意一定的概率。LoD就不是用空白样本去检测了，是对低浓度的分析物样本进行测试，在一定的概率的条件下能测得的最低值，而LoQ也是用低浓度的分析物样本进行测试得出的较低的值，这个值的准确性是有要求的，就是不光要能测到，而且还要保证结果是准确的。更通俗的说超过了LoQ就认为这个结果是准确的报告，低于LoB的结果代表什么都没有（不含有被测物），大于LoD小于LoQ代表有被测物但不能被准确测定，其结果也不准确。

PART04：可报告范围验证——CNAS-GL037

样本的装备：  

低值样本准备：将待测样本（含被分析物）用混合人血清（含被分析物浓度水平较低）或5%牛血清白蛋白生理盐水溶液进行稀释，产生接近于方法测量区间低限（定量下限） 浓度水平的样本，通常为 3-5 个浓度水平，浓度间隔应小于测量区间低限的 20%。

高值样本准备：使用混合血清或5%牛血清白蛋白生理盐水溶液对高值待测样本进行稀释，使其接近于线性范围的上 1/3 区域内，并记录稀释倍数。至少选择3个高浓度样本，稀释倍数为方法性能表明的最大稀释倍数并适当增加或减少稀释比例。

验证方案：在一次运行中将每个低值样本重复测定5-10次，每个高值样本重复测定3次。

数据分析：分别计算每个低值样本的均值、SD、CV值。对高值样本稀释倍数的还原浓度和相对偏差。

可报告范围下限：以方法性能的总误差或不确定度为可接受界值，从低值样本结果中选取总误差或不确定度等于或小于预期值的最低浓度作为可报告范围低限。

可报告范围高限：选取还原浓度与理论浓度的偏差（%）等于或小于方法预期偏倚时的最大稀释倍数为方法为推荐的最大稀释倍数，测定区间的高限与最大稀释倍数的乘积为该方法可报告范围的高限，可报告范围的高限的确定应考虑临床需求（超过可报告范围时，实验室检测结果不能满足其预期总误差或不确定度的要求）。

PART05：LoB、LoD、LoQ验证——WS/T 514-2017

LoB、LoD、LoQ验证起来很复杂，具体的方案有很多， WS/T 514-2017提供了建立和验证的程序，建立LoB、LoD、LoQ比较复杂，这里也不多说，试剂厂家已经都做过了，今天就看看其中的验证部分，其余的请参看WS/T 514-2017文件。  总则：采用一个仪器系统一个试剂批号在多天内对小数量的标本进行重复测定，计算与声明一致的测量结果比例，与适当的临界值进行比较，以判断验证结果，如果观察的比例小于规定临界值，则表明性能不符合声明。文中还提出除了正式的验证程序，还可以用其他视角验证测量程序的检测能力，如包括低值分析物水平的能力验证等。

LoB声明的验证：

方案：1个试剂批号，一个仪器系统，2个空白标本×3天试验×每天重复2次测定=20个结果

数据分析：计算空白测定结果小于或等于LoB声明的百分比；将计算的百分比与附录E中的临界值比较（如果没有匹配的测定结果总数N，选择最接近的值），如果观察百分比大于附录E中的值，则验证成功，如果小于附录E中的值，验证失败，查找原因。

LoD声明的验证：

方案：1个试剂批号，一个仪器系统，2个声明LoD附近浓度的标本×3天试验×每天重复2次测定=20个结果（如果提供LoD声明，可按照LoB声明验证方案进行验证，如果验证通过，则使用该声明，如果验证失败或未提供LoD声明，按照WS/T 514-2017中的6.1先确立LoD）

数据分析：计算低值测定结果等于或超过LoD声明的百分比，将得到的百分比与附录E中的临界值比较（如果没有匹配的测定结果总数N，选择最接近的值），如果观察百分比大于或等于附录E中的值，则验证成功，如果小于附录E中的值，验证失败，查找原因。

LoQ声明的验证：

方案：1个试剂批号，一个仪器系统，2个声明LoQ附近浓度的标本×3天试验×每天重复2次测定=20个结果（此方案使用于基于TE准确度木匾的LoQ声明验证，仅基于精密度目标的LoQ声明可通过CLSI ER15中的精密度验证进行验证）

数据分析：对没有标本计算靶值±允许TE；计算每个标本落在允许总误差范围内的检测结果的个数，然后计算所有检测结果满足LoQ声明的可接受标准的比例，将得到的百分比与附录E中的临界值比较（如果没有匹配的测定结果总数N，选择最接近的值），如果观察百分比大于或等于附录E中的值，则验证成功，如果小于附录E中的值，验证失败，查找原因。

司南说：  

对于可报告范围的验证，其实更多的是稀释倍数的验证，验证的是仪器厂家声明的参数是否可以应用在当前状态检验系统，并确定在当前状态下可以汇报给临床的可以满足临床要求的结果的范围，具体内容其实很多，可参考YYT 1789.4-2022、CNAS-GL037、WS/T 514-2017、CLSI EP06等文件进行选择方案并实施验证，无论用的是哪一个程序文件，最后的目的都是满足于临床要求即可，其他的验证也是如此，最后说的还是那句老话：检以求真，验以正德！

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题图 | veer.com

来源 | 司南说检验