动物免疫抗体

动物免疫

（1）动物的选择目前常用的免疫动物为来自BALB/c小鼠和Lou大鼠以制备小鼠单克隆抗体和大鼠单克隆抗体。

（2）免疫方法：常用的免疫方法有以下三种

体内免疫法：通常指皮下，肌肉及腹腔免疫，多适用于各种颗粒性抗原和可溶性抗原。一般颗粒性抗原细胞的用量为2×107，且不需要加佐剂；可溶性抗原用量一般情况下不超过100µL，并需要加适宜的免疫佐剂。

体外免疫法：从脾脏或者外周血分离B淋巴细胞在体外与抗原共同培养。此方法多用于制备单克隆抗体，如乙肝疫苗基础免疫后，取人外周血分离B淋巴细胞与乙肝表面抗原共同培养，制备人抗乙肝单抗。

脾内免疫法：借助外科手术暴露动物的脾脏，将抗原直接注入脾脏。此方法一般需抗原量少，适用于一些来源有限且昂贵的抗原免疫。

（3）免疫过程：

可溶性抗原加佐剂后，皮下多点注射，至少三点以上，基础免疫一般4-6周，同剂量抗原加强免疫后，于融合前3-4天，静脉加强。

颗粒性抗原基础免疫2-3周，间隔一周加强免疫，2-3次，于融合前3-4天用相应抗原静脉加强后取脾B淋巴细胞用于融合。

骨髓瘤细胞的选择

要取得良好的细胞融合效果，所用的杂交瘤细胞必须处于良好的生理状态，处于对数生长期的瘤细胞最佳。细胞数低于104/mL时，细胞生长缓慢，一般在104-5×105/mL时呈对数生长，此时细胞浑圆透亮，大小均一，排列整齐。当细胞密度超过106/mL以上时，细胞停止分裂，细胞发暗，皱缩。因此一般细胞传代选择(1-5)×105/mL的浓度，且融合时活细胞数至少应该大于90%。

一株好的骨髓瘤细胞株应该具备以下几个特点：

1）稳定，易培养；

2）自身不分泌免疫球蛋白；

3）融合率高；

4）属于HGPRT缺陷株，便于HAT培养基筛选杂交瘤细胞。

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